案例分享——AG真人5L反响器培育CHO细胞表达一种融

  工程案例     |    ###
CHO细胞是被普遍使用于重组卵白、抗体等表达的哺乳植物细胞系。CHO细胞的无血清培育有利于产品的卑鄙纯化、增加血清的外源病毒净化等潜伏危害。
AG真人生物反响器接纳完全干净不锈钢设计，提供全主动CIP/SIP，五种搅拌桨能全方位满意差别细胞的生长，控制体系基于ISA88设计，愈加宁静准确波动，提供本性化需求定制的生物反响器，片面满意客户从小试、中试到范围化消费全方位需求，上面联合AM-5L生物反响器无血清纯悬浮培育CHO细胞的培育结果举行介绍。
一、培育配景
反响器：A&M 5L生物反响器
表达产品：一种交融卵白，胞外排泄
细胞株：CHO/dhrf细胞悬浮培育株
培育基：HyQ SFM4CHO
摇瓶产量：200-300ug/ml左右，扩展体积培育后卵白产量降落
二、培育条件
细胞生临时DO：50%
细胞生临时pH ：7.2
细胞生临时T：37℃
细胞表达期T：34℃
转速率：60rpm
劳绩体积：3L
细胞培育期：共6天
细胞表达期：共4天
三、培育历程
培育历程：预备种子细胞0.8×106cells/ml，活率95%，1000ml打入生物反响器内，留少许样品检菌，设置好参数，启动主动控制形态，天天依据细胞密度、残糖量、浸透压补加培育基、稀释液和碱，细胞形态精良，如下：
案例分享——AG真人5L反响器培育CHO细胞表达一种融(图1)

表达历程：细胞密度和体积抵达要求后，降温转表达。
四、培育数据：
案例分享——AG真人5L反响器培育CHO细胞表达一种融(图2)

细胞耗糖曲线：
案例分享——AG真人5L反响器培育CHO细胞表达一种融(图3)


细胞活率曲线：
案例分享——AG真人5L反响器培育CHO细胞表达一种融(图4)

卵白表达量：
案例分享——AG真人5L反响器培育CHO细胞表达一种融(图5)

五、后果剖析
1、细胞培育历程中天天取样，察看细胞形态，检测残糖及浸透压，计数及活率，补加培育基和稀释液，细胞增殖正常，活率正常。
2、卵白表达陪同整个细胞生长历程，当活率低于80%时劳绩下罐，以免其他代谢杂质增多倒霉于前期卵白分散纯化。
3、培育后果标明，在AG真人5L生物反响器上扩展培育后，工艺参数控制准确波动，细胞密度和表达量明显进步。